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羟苯磺酸钙对肌氨酸氧化酶法检测肌酐的干扰
作者：余久如 潘桂红 鞠萍
作者单位：湖北省黄石市第二医院检验科(余久如、鞠萍)；武钢大冶铁矿职工医院检验科(潘桂红)
来源：《中华检验医学杂志》 2013年2月 第36卷第2期
血清肌酐是评价肾小球滤过功能的有效指标，临床常用于肾功能监测以及肾功能衰竭患者透析治疗的指征。羟苯磺酸钙是预防和治疗微血管循环障碍引起的多种疾病以及糖尿病并发视网膜病变的常用药物，肾功能不全患者使用羟苯磺酸钙后，肌氨酸氧化酶法血清肌酐水平大幅降低，常被认为是药物治疗的显著效果。但有些患者采用不同原理的脱亚胺酶法检测后发现肌酐水平在两种酶法间存在较大差异，临床医生和患者对实验室检验结果的准确度提出了质疑，不准确的检测结果造成对患者肾功能的误判，甚至延误治疗。
目前未见羟苯磺酸钙对肌氨酸氧化酶法检测肌酐干扰的实验数据报道。本研究依据CLSI EP7-A2文件通过患者体内和体外干扰实验，探讨羟苯磺酸钙对肌氨酸氧化酶法检测肌酐的干扰。
对象与方法
一、对象
1.患者：体内干扰实验患者选择于2011年5月至10月间黄石市第二医院收治10例慢性肾脏病患者(符合K/DOQI指南诊断标准)，男6例，女4例，年龄56(37～68)岁。排除标准：有明显心、肺及肝功能障碍者，发热及血液白细胞计数高于参考范围者。采集患者羟苯磺酸钙服药前和服药l周清晨空腹静脉血，分离血清-40℃保存待测。同期收集患者身高、体重等病历信息。本研究征得患者知情同意和临床医生的支持，药物的使用仅依据病情的需要，用药剂量为1.0～1.5g/d(分2-3次口服)。
2.仪器和试剂：（略）
3.干扰实验本底血清：（略）
二、方法
1.体内干扰实验：（略）
2.体外干扰样品制备：（略）
3.体外干扰样品测量：（略）
4.数据分析：（略）
结果
一、体内干扰实验
10例体内干扰实验患者羟苯磺酸钙服药前和服药1周Urea、Scrl、Scr2、eGFR检测结果见表1。[尿素(Urea)、肌氨酸氧化酶法肌酐(Scrl)、脱亚胺酶法肌酐(Scr2)、半胱氨酸蛋白酶抑制剂C(Cystatin C)]
二、干扰筛选实验结果
干扰筛选实验每份标本重测5次，肌氨酸氧化酶法：对照样品均值404.0μmoL/L，实验样品dmax95%CI为(-173.90±2.86)μmoL/L，dmax为14.14μmoL/L；脱亚胺酶法：对照样品均值407.1μmol/L，实验样品dmax95%CI为(1.21±3.14)μmol/L，dmax为14.25μmol/L。结果显示羟苯磺酸钙对Scr2无干扰，对Scrl有严重负干扰。
三、干扰剂量效应实验结果
两种肌酐样品在羟苯磺酸钙浓度1.25～20.00mg/L范围内干扰剂量效应实验结果见表2、图1，2（略）。低浓度肌酐(65.9μmol/L)样品，干扰剂量效应回归方程显著性检验F值2546.7、P值0.000，羟苯磺酸钙在3.5mg/L浓度下干扰小于预设的临床可接受标准(95%CI)；高浓度肌酐(404.5μmol/L)样品，干扰剂量效应回归方程显著性检验F值7943.4、P值0.000，羟苯磺酸钙在4.4mg/L浓度下干扰小于预设的临床可接受标准(95%CI)。
讨论
血清肌酐酶法检测主要分两大类：肌酐胺基水解酶法、肌酐脱亚胺酶法，而偶联Tfinder类的肌氨酸氧化酶法是国内使用最广泛的方法，即通常所说的肌酐酶法，常见溶血、黄疸及其他药物的干扰文献报道
干扰实验的临床可接受标准并无明确指标，EP7-A2文件提出了一些参考的依据，包括部分分析物的准确度要求(总允许误差)、生理学变异以及临床专家的意见等。干扰是总允许误差减去方法偏倚及不精密度后的残差，因此实验方法原有的偏倚和不精密度也是确定干扰判断标准的重要依据。本研究综合以上各因素确定偏差3.5%或6.63μmoL/L(取绝对值大者)作为干扰实验的临床可接受标准。
鉴于肌酐检测结果的不确定性，体内干扰实验中引用基于Cystatin C的eGFR，用于实验中观察患者GFR的变化，考虑到方程的适用性，该指标不作为临床诊断、治疗的依据。干扰筛选实验药物浓度的选择参考有关文献及患者用药剂量，干扰剂量效应实验药物浓度的选择围绕峰浓度并尽量涵盖可能有判断价值的浓度。
羟苯磺酸钙对肌氨酸氧化酶法肌酐有严重负干扰，原因可能与羟苯磺酸钙的还原性有关，羟苯磺酸钙消耗了肌氨酸氧化酶法反应过程中参与Trinder反应的H2O2，抑制了生色酚的氧化显色。本研究中肌氨酸氧化酶法肌酐主要是浙江东瓯公司试剂，羟苯磺酸钙浓度为100mg/L的高浓度肌酐样品则用了四种方法进行测试，浙江东瓯、北京利德曼、日本关东化学、罗氏肌酐酶法试剂干扰值分别为-173.9、-175.6、-134.1、-145.6μmoL/L。以上四法均为肌氨酸氧化酶法，试剂成分差异主要是生色酚衍生物的不同，分别为：N-乙基-N-(3-磺丙基)-3-甲氧基苯胺(ESPAS或ADPS)、N-乙基-N-(2-羟-3-磺丙)-3,5-二甲氧-4-氟苯胺(FDAOS)、N-乙基-N-(3-磺丙基)-3-甲基苯胺(ESPMT或TOPS)、2,4,6-三碘-3-羟基苯甲酸(HTIB或HTIBA)，显色最大光吸收摩尔吸光系数(ε)分别为：2.79×10^4、2.22×10^4、3.74×10^4、3.12×10^4L/(mol·cm)。ε越大灵敏度越高，从以上数据观察，选用生色酚衍生物ε越大的干扰程度越小，当然试剂的抗干扰能力主要与反应条件的优化、生色稳定性、针对性添加物等有关。
干扰剂量效应实验显示干扰值与干扰物浓度、肌酐基础浓度均有关，健康人单次服用羟苯磺酸钙0.5g后血药浓度达峰时间(Tmax)3～6h，峰值浓度约8～15mg/L，消除半衰期(t1/2)在5h左右。羟苯磺酸钙通过肾脏和肠道排泄，其中90%为原型、10%为代谢产物。羟苯磺酸钙用法多为1.0～1.5g/日(分2～3次)，6个t1/2后血药浓度达稳态的95%左右，GFR正常的患者24h血药浓度均在6mg/L以上，所以患者服药期间无论何时采集标本肌氨酸氧化酶法肌酐检测都会受干扰。肾功能不全患者GFR显著降低，容易出现主要通过肾脏排泄药物的蓄积。该类患者羟苯磺酸钙药代动力学特性未见报道，无法估计药物蓄积的程度，但从患者体内干扰实验结果和剂量效应方程推算，药物蓄积很严重，因此，该类患者的药物减量使用应得到临床足够的重视。
鉴于羟苯磺酸钙对常用肌氨酸氧化酶法血清肌酐检测的干扰，导致肾功能不全患者用药后不同酶法结果差异，建议服用羟苯磺酸钙的肌酐结果在临床评价时需加以高度警惕，如果同期尿素等其他指标降低不明显，应在有条件时选用其他原理的肌酐测定法复核，以便对患者肾功能做出客观评价。
参考文献 略 |
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发表于 2017-1-2 16:35:11
发表于 2017-1-6 08:13:03