党参皂甙对肾移植免疫排斥反应的作用

大光

党参皂甙对肾移植免疫排斥反应的作用
作者：张应添，何波，赵海，林涛
（重庆医科大学附属儿童医院泌尿外科；儿童发育疾病研究省部共建教育部重点实验室）
来源：《西安交通大学学报（医学版）》 2012年1月 第33卷 第1期




    肾移植是目前治疗终末性肾病的唯一手段。但是，由于缺血－再灌注损伤与排斥反应的存在，使移植肾的存活时间、移植后功能以及受体的生存时间均不尽人意。党参是一种传统的“扶正固本”益气的中药。前期的研究表明党参皂甙对肾移植缺血－再灌注损伤具有保护作用。本研究旨在对党参皂甙在移植肾排斥反应中所起的作用进行探讨，以便进一步阐明党参皂甙应用于肾移植的作用。

1　材料与方法

1.1　大鼠肾移植模型的建立  选用重庆医科大学实验动物中心提供的健康成年ＳＤ大鼠分别作为供体和受体，体重250～350ｇ，ＳＰＦ级条件下喂养。参照康俊升等的方法稍作改动：原位低温灌注，腹主动脉袖套法吻合，肾静脉袖套法吻合，输尿管植入膀胱尿路重新建立大鼠原位肾移植模型。

1.2　实验分组  将60只ＳＤ大鼠随机分为3组：Ⅰ组为假手术组（ＳＨ），12只，开腹后不作任何处理，直接关腹；Ⅱ组为生理盐水对照组（ＮＳ），24只，随机取12只分别作为供体和受体，受体于术前48ｈ开始，每24ｈ按8ｍｇ／100ｇ腹腔注射生理盐水，直至相应的观察时间为止；Ⅲ组为党参皂甙组（ＳＡ），24只，随机取12只分别作为供体和受体，受体于术前48ｈ开始，每24ｈ按8ｍｇ／100ｇ腹腔注射党参皂甙溶液，直至相应的观察时间为止。根据观察时间点的不同，以上3组又分别分为3ｄ组、5ｄ组及8ｄ组3个亚组。各组受体大鼠分别于相应的时间点处死，切取部分移植肾标本放入40ｇ／Ｌ甲醛的小瓶中固定，以备病理检查，另一部分移植肾标本置于－80℃冰箱保存，以备ＲＴ－ＰＣＲ检测ＩＣＡＭ－1表达；切取受体脾脏标本置于－80℃冰箱保存，以备ＲＴ－ＰＣＲ检测ＩＬ－2表达。

1.3　材料  略

1.4　ＲＴ－ＰＣＲ技术检测移植肾ＩＣＡＭ－1及受体脾脏ＩＬ－2的表达  略

1.5　排斥反应分级  肾组织常规固定、脱水、包埋，制作石蜡切片，切片经二甲苯脱蜡，酒精梯度脱水，ＨＥ染色观察肾组织病理形态的改变，采用国际统一的“ＢａｎｆｆＳｃｈｅｍａ（1997年）”移植肾病理诊断标准，对移植肾的病理改变进行分类、分级评定。

1.6　统计分析  略

2　结果

2.1　肾组织中ＩＣＡＭ－1的表达  第3天时，3组间ＩＣＡＭ－1表达差异无统计学意义（Ｐ＞0.05）；第5天时，对照组和皂甙组与假手术组相比，差异均有统计学意义（Ｐ＜0.05），但对照组与皂甙组间差异无统计学意义（Ｐ＞0.05）；第8天时，各组间差异均有统计学意义（Ｐ＜0.05），电泳条带亮度假手术组最弱，对照组较强，皂甙组最强（图1）。

2.2　脾组织中ＩＬ－2的表达  第3天时，3组间ＩＬ－2表达差异无统计学意义（Ｐ＞0.05）；第5天时，对照组与皂甙组间差异无统计学意义（Ｐ＞0.05），但与假手术组相比，差异均有统计学意义（Ｐ＜0.05）；第8天时，各组间差异均有统计学意义（Ｐ＜0.05），电泳条带亮度假手术组最弱，对照组较强，皂甙组最强（图2）。

2.3　党参皂甙对移植肾排斥反应的影响　ＳＨ组：肾组织12个ＨＥ染色全部显示正常；ＮＳ组：3ｄ时，肾组织4个ＨＥ染色全部提示临界排斥反应；5ｄ时，肾组织3个ＨＥ染色提示轻度排斥反应，1个临界排斥反应；8ｄ时，肾组织4个ＨＥ染色全部提示中度排斥反应。ＳＡ组：3ｄ时，肾组织3个ＨＥ染色提示临界排斥反应，1个轻度排斥反应；5ｄ时，3个ＨＥ染色提示轻度排斥反应，1个中度排斥反应；8ｄ时，肾组织4个ＨＥ染色全部提示中度排斥反应（表1、图3）。

表1　各组肾组织排斥反应分级情况
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组别   例数    正常           急性排斥反应分级（Ｂａｎｆｆ标准）
                                 临界  轻度  中度  重度
--------------------------------------------------------------
Ⅰ     12　    12                 －    －    －    －
Ⅱ     12      －                 5　    3   　4    －
Ⅲ     12      －                 4    　3　   5    －
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3　讨论

    众所周知，缺血－再灌注损伤和移植排斥反应是器官移植亟需解决的二大难题，也是目前的研究热点。党参是一种传统的中药，具有抗氧化、清除自由基、改善微循环的作用，其主要由多糖、单糖、党参皂甙Ｉ、Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ、苍术内酯类等构成。有研究表明党参对脑、肝缺血－再灌注损伤有一定的保护作用。本课题组前期研究也表明党参皂甙对肾移植缺血－再灌注损伤具有保护作用，但党参对肾移植免疫排斥方面的影响未见报道。本研究旨在探讨党参皂甙在移植肾排斥反应中的作用，为研究党参有效成分对肾移植的药理作用提供实验依据。

    本实验着重于研究党参皂甙对肾移植免疫排斥反应的作用。实验发现，第3天时，ＩＣＡＭ－1和ＩＬ－2的表达在各组间均无明显差异。第5天时，ＩＣＡＭ－1和ＩＬ－2的表达在党参皂甙组和生理盐水组之间亦无差异，而与假手术组相比，均有显著性差异。说明第3天到第5天时，党参皂甙对肾移植免疫状态的作用不明显；但第8天时，ＩＣＡＭ－1和ＩＬ－2的表达在各组间差异明显，假手术组表达最低，生理盐水组表达较高，而党参皂甙组表达最高，说明党参皂甙此时已经会加重肾移植排斥反应。

    目前，党参皂甙引起肾移植排斥反应加重的机制尚不明确。正常情况下，ＩＣＡＭ－1表达水平较低，内皮细胞激活后其表达增强，介导ＰＭＮ黏附于血管内皮细胞。ＩＣＡＭ－1的表达上调为ＰＭＮ的黏附、浸润提供了物质基础，ＩＣＡＭ－1的表达量还决定了ＰＭＮ的浸润程度。细胞间黏附分子ＩＣＡＭ－1大量表达，可引起移植肾炎性白细胞浸润增加，浸润的白细胞大量释放ＴＮＦ－α等细胞因子，从而加重了排斥反应引起的移植肾组织损伤。另外，趋化因子及其受体对白细胞的活化、淋巴细胞的生成、游走、分化、归巢以及免疫调节均在器官移植领域中有重要意义，趋化因子对细胞间黏附分子的表达可能存在一定的关系。

    党参作为一种传统补益中药，具有增强免疫力的作用。肾移植术后随着机体免疫力的提高，继续使用党参这类补益药，可能促进了脾脏淋巴细胞增生，ＩＬ－2表达的升高，这可能就引起了机体病理免疫功能的亢进，进而加重肾移植排斥反应发生的程度。另一方面，静止状态的Ｔ细胞一般不分泌ＩＬ－2，一旦受到递呈抗原的刺激，便快速大量分泌ＩＬ－2，因此ＩＬ－2的转录和合成常被用作Ｔ细胞活化的标志。ＩＬ－2诱导抗原特异性Ｔ细胞的增殖分化，促进Ｂ细胞增殖和抗体产生。有研究显示，ＩＬ－2ｍＲＮＡ表达在ＡＲ发生前后增强，而未发生ＡＲ的患者无明显ＩＬ－2ｍＲＮＡ的表达增强。

    移植肾组织标本病理检查也提示应用党参皂甙后，移植肾排斥反应趋于加重，但差异无ＩＬ－2及ＩＣＡＭ－1变化大，说明ＩＬ－2和ＩＣＡＭ－1表达变化较肾组织病理变化敏感。

    综上所述，在缺血再灌注损伤期内，党参皂甙应用于肾移植可以起到保护作用。在第3～5天，即在缺血再灌注损伤期过后，排斥反应发生的临界阶段，党参皂甙对肾移植排斥反应所起作用不明显，但若继续长期使用党参皂甙，则可能会加重移植肾的损伤。故党参皂甙应用于肾移植保护缺血再灌注损伤后，建议及时停用。至于党参皂甙加重肾移植排斥反应的具体机制，尚有待进一步研究。

参考文献：略

晓云

肾移植后使用中药要小心.

血透人生

感谢大光的资料，学习了

tiandi

样本太少，时间太短，急于发论文，中国的科研就是这样

大光

tiandi 发表于 2013-3-25 08:07
样本太少，时间太短，急于发论文，中国的科研就是这样

是的，这只是个动物的肾移植“临床”实验，但是对人类的肾移植临床有借鉴意义。

我以前曾服用过含党参的中药汤药，感到移植肾有涨痛感，吃了几付就不敢吃了。前一个时期我为治感冒，断断续续共吃掉了一盒小柴胡颗粒。小柴胡颗粒含有党参、甘草、大枣等。我每次吃一般不超过2天，成药中党参的含量也少，这样短期的应用，我想不会有什么大问题。前些日子，我腹泻了，肚子不疼，不发烧，水泻了四次后当夜吃了思密达，又泻了2次才止住了。但第二天上午又泻起来，药店里给推荐了止泻保童颗粒，但药里有人参，我怀着忐忑的心情一次一包吃了2次就好了。

九九

心理加身理。感性加理性。
各种药物“临床”实验太少，特别是中药移植人吃的也有，特别是扶正汤剂，究竟能不能吃？究竟有多少排异的？范例太少。

大光

九九 发表于 2013-3-25 20:15
心理加身理。感性加理性。
各种药物“临床”实验太少，特别是中药移植人吃的也有，特别是扶正汤剂，究竟能 ...

扶正的汤，补气的药，这些药物的肾移植临床实验不好做，不道德，一旦排斥了就是大事。一般从理论上可以认为，提高免疫会增大排斥的风险。有一些实例的经验教训是可以供我们借鉴的。