请教并讨论一下HBVDNA的检测法及参考值

安若泰山

做了HBVDNA检测，发现参考值与去年有区别：去年是0~10*10^3，也就是<1000都算阴性，今年是0~5*10^2，也就是<500才算阴性。问了医生，还有自费的PCR检测法更精确，>20都能检测出来。
按说，HBVDNA应该是0才是健康的，所以我们做到现在的检查虽然都是阴性似乎都不能说明什么问题。
现在想请教或者是请大家讨论的是，我们肝移植服用核苷类药物，打乙免，不管2、4、5阳性还是2、5阳性或者其它，那么倘若按<1000但>500或者<500但>20甚至干脆大于1000，我们以什么标准来判定我们该继续服用原来的药物比如博罗定、拉米，还是已经变异或耐药？

杭州多多

转一篇：HBVDNA的检测法
目前检验病毒的方法，除去血清培养基方法（HIV， CMV， HBV等病毒很难在培养基中分离检验），大致有三种:：

　　PCR (polymerase chain reaction 或RT-PCR等)，最常用的方法，很敏感，但误差大，价钱比较贵，通常单位用 copies/ml of plasma；

　　bDNA (branched chain DNA assay)， 也是目前常用的方法，敏感，常规化，结果比较稳定，价钱比较便宜，通常单位用 units/ml of plasma (pg/ml， fg/ml)；

　　NASBA (nucleic acid sequence-based amplification)，不常用，很敏感，误差大，工时长，价钱最贵，通常单位用 units/ml of plasma (pg/ml， fg/ml)；

　　

　　就HBVDNA而论，目前测验HBV DNA时通常要达到两个目的。一个是定性(qualitative)，另外一个是定量(quantitative) 。

　　HBVDNA定性的测验注重于HBVDNA的存在，它通常可以测到低于100copies/ml的病毒存在。当然还有更精确的方法，通常用于科研实验室中，可以测到更低的含量。一般临床用的都可以测到1000-2000 copies/ml以上的精度。定性通常只给阴性、阳性的结果。

　　另外一方面，定量的测定着重于HBV DNA量存在的多少。通常用于定量的极限在0.1-5 pg/ml (1 pg/ml = 283，000 copies/ml)之间。同样，更精确的仪器可以测到0.001-0.005 pg/ml的精度。国外常用 fg/ml 为单位。copies/ml 比 fg/ml， pg/ml 单位更小。fg/ml， pg/ml 显示定量比  X 10。

　　关于 copies/ml， pg/ml， fg/ml的换算大致如下:

　　Picogram: 1 pg = 10-12 g= 10-9 mg= 10-6 mg= 10-3 ng= 103 fg

　　Femtogram: 1 fg= 10-15 g= 10-12 mg= 10-9 mg= 10-6 ng= 10-3 pg

　　1 pg/ml = 283，000 copies/ml

　　HBVDNA正常指标

　　HBVDNA的正常指标或标准可以说是"不能100%设定的。"

　　定性测量的阳性通常说明病毒容易传染给他人， 阴性说明不容易传给他人。 一般讲血中测到少于1000copies/ml一下可为阴性。

　　定量测验， 因为结果是数字的， 而不是"高低，" "阴阳，" "正常/不正常，" 也就比较麻烦。确定正常值指标一定要知道所做实验的 "参考范围" (reference range)。参考范围是因测验的仪器，方法，试剂，病人年龄，性别，条件等而定的。 如，目前一般生产应用的Ultra Sensitive Quantitative PCR (高灵敏度定量PCR) 法的测验参考范围是在：

　　Less than 0.001 pg/mL

　　Less than 2.3 log copies/mL

　　Less than 200 log copies/mL

　　就是说这种方法可以测到参考范围是在0.001 到 700 pg/ml间， 约合在2.3-8.3 log 拷贝/毫升(200-200，000，000 拷贝/毫升)间；但是不同方法，仪器，批量这个范围不同而正常值(对照)也就不同。 现在技术先进，人们可以在大量生产时人为地把这个范围弄稳定/固定。

　　此外定量是根据拷贝/毫升决定多少而定。它只有量的定性! 只要测得到就是阳性，不是在一个病毒含量浓度没病，一个含量有病，何况测不到也不能说没病了 。

　　所以要想知道结果的正确与否，含量高低等应该和所做DNA单位索取所用方法及仪器的参考范围及标准值或正常对照值。

　　查不到病毒DNA(Undetectable DNA)是不是就说明疾病治愈，不感染了?

　　查不到病毒的DNA不能说明已经不感染疾病，或者是治愈了。查不到病毒可能是因为现有仪器和水平不能测到更精确程度。目前很好的仪器可以测到20copies/ml之低血中的病毒存在。但是就是低于20拷贝还是有病毒存在在那里，而且病毒可能存在除血清以外的液体，细胞等中。病毒变化是以log (10的次方)计算的，半个log变化都属于轻微的。

　　测验HBV DNA的一点建议

　　一个有经验的医生，第一次给病人测定DNA，用药或检查前，都会用两种不同的方法确定病毒的底线。之后，如果没有特别误差，最好是沿用一种方法。这样可以比较准的记录病毒量的变化。不会因为今天在地坛做的和下次在协和做的结果看起来离谱 (可能方法，参考范围，仪器不同)。医生也是一样，最好固定。不然每个医生不同想法 (不过想法一样就坏了)，最后弄得患者一头雾水了。当然第二，第三位医生的会诊建议是不可以忽略的。

杭州多多

1、选定一个医院同一种方法进行检测；
2、当大于1000、肝功能异常可以判断抗病毒药已经变异或耐药。
3、“HBVDNA应该是0”是理想化结果，不能认为现在不可认知就判断为不能说明什么问题。因为在医学临床上一般认为小于1000（阴性），就说明病毒得到了有效抑制，也不容易传给他人了。
4、小于1000，小于500、小于100、小于20。。。。。——都表示存在“HBVDNA应该是0”的可能。

凉言

学习了

doudou

杭州多多 发表于 2014-5-31 20:08
1、选定一个医院同一种方法进行检测；
2、当大于1000、肝功能异常可以判断抗病毒药已经变异或耐药。
3、 ...

非常受用！{:soso_e183:}

安若泰山

谢谢多多详尽解答！
我迷糊的就是因为越来越精准了，参考值有变化，原来低于1000为阴性，现在要低于500，阳性率不是提高了吗？要是测出来6.0*10^2, 按去年还是阴性而现在就是阳性了，要是阳性总不能视而不见，去年可以很安然，现在就不知该怎样处理了？

安若泰山

安若泰山 发表于 2014-6-2 06:22
谢谢多多详尽解答！
我迷糊的就是因为越来越精准了，参考值有变化，原来低于1000为阴性，现在要低于500， ...

谢谢指点！
这样的指标越来越精确，阳性点越来越低从另一个方面看也有好处，它可以警醒我们，不要忘乎所以，在用药、打乙免等方面还得慎而又慎，小心驶得万年船！