45例肾移植术后稳定状态受者淋巴细胞亚群的动态变化及其与肾功能的相关性分析

大光

　　肾移植术后，移植肾的植入、免疫抑制剂的应用促使肾移植受者的免疫系统启动十分复杂的免疫应答和免疫调节，从而影响肾移植受者的免疫状态，而淋巴细胞亚群是免疫状态的最直观体现。另外，感染和排斥反应是肾移植受者最常见的并发症和死亡原因，不同病原菌感染和排斥反应时淋巴细胞亚群也有不同的表现。因此，淋巴细胞亚群的检测在肾移植受者术后免疫状态评估中极为重要。
　　中国人民解放军总医院第八医学中心移植研究室马锡慧等利用流式细胞术（FCM）检测45例肾移植受者术后15d以及1、3、6个月共计180份外周血样本的淋巴细胞亚群比例和绝对值，分析淋巴细胞亚群随时间的动态变化及其与肾功能指标的相关性，现摘录相关内容以供学习交流。

　　一、研究对象

　　筛选并分析2016年10月至2018年4月于中国人民解放军总医院第八医学中心移植外科行首次肾移植的45例受者的临床资料，其中男35例，女10例，年龄（41±12）岁。原发病包括慢性肾衰竭尿毒症期32例，IgA肾病8例，肾小球肾炎5例。
　　所有受者均采用他克莫司+吗替麦考酚酯+糖皮质激素三联抗排斥治疗方案。
　　所有受者术后血清肌酐（Scr）呈阶梯性下降且波动在正常范围内（Scr＜176μmol/L），随访半年内移植肾功能稳定，明确诊断未发生移植物功能延迟恢复（DGF）、感染、排斥反应、肾功能不全等，术后群体反应性抗体（PRA）阴性。

　　二、结果

　　（1）肾移植受者术后肾功能随时间延长的动态变化
　　45例受者术后15d及1、3、6个月Scr值分别为（105±29）、（106±26）、（110±23）、（111±27）μmol/L，经单组重复测量数据方差分析，4个不同时点间差异均无统计学意义（F=1.421，P=0.244）。
　　45例受者术后15d及1、3、6个月血尿素氮（BUN）值分别为（9.1±2.5）、（7.8±2.3）、（6.7±1.9）（6.9±2.2）mmol/L，经单组重复测量数据方差分析，4个不同时间点间差异有统计学意义（F=20.532，P＜0.001）。其中，术后15d与术后1个月、术后1个月与术后3个月比较，差异均有统计学意义（P=0.002、P=0.001）；术后3个月与术后6个月比较，差异无统计学意义（P＞0.05/3）。

　　（2）肾移植受者淋巴细胞亚群比例和CD4/CD8比值随术后时间延长的动态变化
　　肾移植受者术后不同时间点的淋巴细胞亚群比例和CD4/CD8比值见表1。经单组重复测量数据方差分析，CD3+T细胞、CD3+CD8+T细胞、CD3+CD4+T细胞、NK细胞、B细胞比例及CD4/CD8比值在术后4个不同时间点间差异均有统计学意义（F=4.556，P=0.005；F=9.703，P＜0.001；F=4.399，P=0.006；F=20.526，P＜0.001；F=71.564，P＜0.001；F=10.174，P＜0.001）。



　　组内不同时间点两两比较结果显示，CD3+T细胞比例4个时间点依次比较差异均无统计学意义（均为P＞0.05）。术后15d与术后1个月比较，CD3+CD8+T细胞、CD3+CD4+T细胞、NK细胞比例及CD4/CD8比值，差异均有统计学意义（P=0.009、P=0.004、P＜0.001、P=0.004）。上述4项指标术后1、3、6个月依次比较，差异均无统计学意义（均为P＞0.05/3）。B细胞比例术后15d与术后1个月比较、术后1个月与术后3个月比较，差异均有统计学意义（均为P＜0.001），术后3个月与术后6个月比较，差异无统计学意义（P＞0.05/3）。

　　（3）肾移植受者淋巴细胞亚群绝对值随术后时间延长的动态变化
　　肾移植受者术后不同时间点的淋巴细胞亚群绝对值见表2。经单组重复测量数据方差分析，CD3+T细胞、CD3+CD8+T细胞、CD3+CD4+T细胞、NK细胞、B细胞绝对值的4个不同时间点间差异均有统计学意义（F=10.596，P＜0.001；F=11.157，P＜0.001；F=5.653，P=0.001；F=23.736，P＜0.001；F=12.982，P＜0.001）。



　　组内不同时间点两两比较结果显示，CD3+T细胞、CD3+CD8+T细胞、CD3+CD4+T细胞和NK细胞绝对值术后15d与术后1个月比较，差异均有统计学意义（P=0.001、P=0.002、P=0.003、P＜0.001）。上述4项指标术后1个月与术后3个月比较，CD3+T细胞、CD3+CD4+T细胞和NK细胞绝对值术后3个月与术后6个月比较，差异均无统计学意义（均为P＞0.05/3）。CD3+CD8+T细胞绝对值术后3个月和术后6个月比较，差异有统计学意义（P=0.015）。B细胞绝对值术后1个月与术后3个月比较，差异有统计学意义（P=0.001）。

　　（4）肾移植受者淋巴细胞亚群与肾功能指标相关性分析
　　Pearson相关性分析结果显示，Scr与BUN呈正相关（r=0.399，P＜0.001），淋巴细胞亚群比例和绝对值与Scr均不相关（均为P＞0.05）。肾移植受者淋巴细胞亚群与BUN的相关性分析见表3和图1、2。CD3+CD8+T细胞比例和绝对值与BUN均呈负相关（P＜0.05，P＜0.01），NK细胞比例和绝对值与BUN亦均呈负相关（均为P＜0.001），CD3+CD4+T细胞、B细胞比例与BUN均呈正相关（P＜0.05，P＜0.001），CD3+T细胞绝对值与BUN呈负相关（P＜0.05）。





　　三、讨论

　　肾移植受者因围手术期应用免疫诱导方案、术后常规应用免疫抑制治疗和维持方案，导致其免疫状态发生动态变化，免疫功能下调增加了受者感染的风险，且免疫状态的改变与急、慢性排斥反应的发生也具有相关性。因此，肾移植受者免疫状态的评估尤为重要。淋巴细胞亚群能在一定程度上反映肾移植受者的免疫状态，尤其是淋巴细胞亚群绝对值，因其不受其他亚群影响、可直观反映受者免疫状态，被越来越多的临床医师关注。目前，有关淋巴细胞亚群在肾移植受者感染和排斥反应中表达变化的文献屡见不鲜，虽然也有研究报道肾移植术后稳定状态受者淋巴细胞亚群的变化，但淋巴细胞亚群比例和绝对值随术后时间延长的动态变化笔者未见报道。本研究利用FCM检测45例肾移植受者术后15d及1、3、6个月共计180份外周血样本淋巴细胞亚群比例和绝对值，分析淋巴细胞亚群随时间的动态变化及其与肾功能指标的相关性，以期为肾移植受者制定个体化治疗方案提供理论支持。
　　Scr和BUN是最常用的评价肾功能的指标。本研究对Scr和BUN的比较提示，肾移植受者Scr比BUN恢复更快，Scr在术后15d可达到稳定状态，而BUN在术后3个月才回落至稳定状态。
　　李国文的研究显示健康组、尿毒症组与术后稳定组3组间，CD3+T细胞比例的差异均无统计学意义（2014年）；而尚文俊等报道显示，术前组CD3+T细胞绝对值显著低于健康对照组及术后稳定组（2017年）。本研究中，CD3+T细胞比例4个时间点变化差异无统计学意义，而术后1个月CD3+T细胞绝对值显著高于术后15d，且CD3+T细胞的两大主要亚群CD4+T细胞和CD8+T细胞的比例和绝对值也出现了不一致的变化。因此，淋巴细胞亚群绝对值能更准确地反映某种淋巴细胞的数量变化，而不受其他亚群的影响，故而淋巴细胞亚群绝对值的检测也尤为重要。
　　Vacher-Coponat等报道，免疫抑制剂的联合应用对NK细胞具有明显的抑制作用，其中他克莫司对免疫系统的作用主要是抑制T细胞的活化和增殖。研究表明，他克莫司亦可影响NK、NKT细胞的增殖及功能本研究中，与术后15d相比，术后1个月CD3+CD4+T细胞、CD3+CD8+T细胞和NK细胞绝对值显著升高，提示肾移植受者接受免疫诱导和免疫治疗方案后，T细胞和NK细胞均受到抑制，这与Vacher-Coponat等的研究结果一致。NK细胞比例和绝对值随术后时间延长变化一致，在术后1个月恢复至稳定状态，这与王旭珍等（2013年）的研究结果相一致。
　　CD3+CD8+T细胞绝对值在术后1个月与3个月差异无统计学意义，而术后6个月与术后3个月比较升高，提示肾移植受者CD3+CD8+T细胞随术后时间延长而升高，且在术后3～6个月增长幅度变大，而CD3+CD4+T细胞并不随术后时间延长而升高，这与党受涛（ 2011年）的研究结果一致。
　　有关肾移植术后B细胞功能和数量的变化，文献报道较少。本研究结果提示，B细胞随术后时间延长呈下降趋势，在术后1～3个月下降显著，然后达到稳定状态。这可能与B细胞介导的体液免疫过程在慢性排斥反应的免疫学机制中发挥重要作用有关。
　　长期以来，Scr被作为评价肾功能的首要指标，本研究中Pearson秩相关分析结果显示，BUN恢复至稳定状态的时间比Scr晚，且与淋巴细胞亚群具有相关性，提示BUN在肾移植受者中的作用不容小觑，它可能反映了肾移植受者的肾功能和免疫状态。

　　小结：肾移植术后稳定状态受者淋巴细胞亚群随术后时间延长呈现动态变化，T细胞和NK细胞在术后1个月升高至稳定状态，其中CD3+CD8+T细胞在术后3～6个月进一步升高，B细胞在术后3个月降低至稳定状态。此外，BUN能在一定程度上反映肾移植受者的免疫状态，了解淋巴细胞亚群随术后时间延长的动态变化及与肾功能指标的相关性，可以为临床医师判断肾移植受者免疫状态和制定个体化诊疗方案提供理论支持。

本文摘自《肾移植术后稳定状态受者淋巴细胞亚群的动态变化及其与肾功能的相关性分析》，仅供学习交流，完整准确内容请查阅原文。
原文作者：马锡慧、韩永、李彬钰、孔祥瑞、孙玉洁、肖漓  
作者单位：中国人民解放军总医院第八医学中心移植研究室 北京市器官移植与免疫调节重点实验室
原文来源：《器官移植》 2020年9月第11卷第5期。
原文地址：http：//www.xml-data.org/qgyz/html/1068.html