上调滤泡调节性T细胞治疗肾移植抗体介导的排斥反应

大光

　　抗体介导排斥反应，亦称体液性排斥反应，是由抗体、补体等多种体液免疫效应因子参与所致的排斥反应免疫损伤，是肾移植后常见的排斥反应类型，由于病变表现程度不一、抗体检测技术水平的局限、C4d染色方法的稳定性等因素，抗体介导排斥反应的免疫损伤机制较为复杂。由抗体介导排斥反应引起的移植肾失功目前临床尚缺乏有效的治疗手段。
　　滤泡辅助性T细胞和滤泡调节性T细胞均定位于淋巴，滤泡调节性T细胞是Treg细胞的一个子集，与滤泡辅助性T细胞拥有共同的表型特征。滤泡辅助性T细胞和滤泡调节性T细胞在功能上相互制约，维持机体自身免疫反应的稳定进行，滤泡辅助性T细胞/滤泡调节性T细胞的免疫失衡使得自身抗体的产生失控，自身免疫耐受性丧失，最终引发自身免疫性疾病。
　　mi R-4286是胚胎干细胞分化过程中的重要mi RNA，有研究显示肾移植患者血浆mi R-4286的表达显著上调，mi R-4286可靶向下调转化生长因子β的表达而激活免疫反应，使血浆mi R-4286的表达显著上调。滤泡辅助性T细胞（Tfh）是介导B细胞增殖和向浆细胞分化的主要细胞，滤泡调节性T细胞（Tfr）可通过分泌转化生长因子β等负性调节Tfh细胞，有效抑制肾移植后排斥反应的发生。贵州医科大学附属医院器官移植科一项前瞻性单中心临床对照试验探讨了沉默mi R-4286上调滤泡调节性T细胞治疗肾移植抗体介导排斥反应的作用及机制。


　　一、对象
　　选择2018年12月至2020年12月在贵州医科大学附属医院接受肾移植的患者40例，男30例，女10例，其中20例肾移植后出现排斥反应，平均年龄（37.8±9.7）岁；其余20例为免疫耐受患者，平均年龄（38.3±7.0）岁。
　　纳入标准：年龄在18～65岁之间；接受同种异体肾移植；单次移植；术前未检测到群体反应性抗体；排斥反应组患者符合排斥反应的Banff 2019诊断标准。
　　排除标准：多器官联合移植；合并恶性肿瘤；合并严重的糖尿病或冠心病；移植后患者未严格按照医嘱服用免疫抑制药物。


　　二、结果
　　（一）两组患者肾组织炎细胞浸润与C4d表达（见图1）
　　苏木精-伊红染色显示，排斥反应组患者肾组织内的炎细胞浸润数量多于免疫耐受组[（87.17±13.56）、（18.11±3.95）个/视野，t=4.885,P<0.001]；免疫组化染色显示，排斥反应组患者肾组织内可见广泛的C4d阳性表达，免疫耐受组未见检测到C4d表达。



　　（二）两组患者外周血淋巴细胞内的mi R-4286mRNA表达
　　RT-PCR检测结果显示，排斥反应组与免疫耐受组患者外周血淋巴细胞中的mi R-4286mRNA表达量分别为3.95±0.32、2.18±0.27，组间比较差异有显著性意义（t=4.331,P=0.002）。


　　（三）两组患者外周血淋巴细胞中Tfh与Tfr细胞的比例
　　两组患者外周血淋巴细胞流式细胞术检测结果，见图2。



　　统计分析结果显示，排斥反应组患者外周血淋巴细胞中的Tfh细胞比例高于免疫耐受组（t=3.096,P=0.011）,Tfr细胞比例低于免疫耐受组（t=6.176,P<0.001），见表1。



　　Spearman相关性分析结果显示，mi R-4286mRNA的表达与Tfh细胞比例呈正相关（r=0.715,P=0.009），与Tfr细胞比例呈负相关（r=-0.741,P=0.006）。


　（四）排斥反应患者外周血淋巴细胞各分组相关检测结果
　　（1）各组细胞上清细胞因子的分泌，见表2。



　　与对照组比较，mi R-4286过表达组的转化生长因子β水平降低（t=4.846,P=0.003），干扰素γ、白细胞介素6、白细胞介素21水平升高（t=4.304,P=0.005;t=3.844,P=0.003;t=7.600,P<0.001）;mi R-4286沉默组转化生长因子β水平升高（t=15.053,P<0.001），干扰素γ、白细胞介素6、白细胞介素21水平降低（t=2.929,P=0.026;t=3.563,P=0.005;t=5.439,P<0.001）。与mi R-4286沉默组比较，转化生长因子β阻断组转化生长因子β水平降低（t=1.227,P<0.001），干扰素γ、白细胞介素6、白细胞介素21水平升高（t=1.001,P<0.05;t=2.441,P=0.005;t=1.554,P<0.001）。
　　（2）各组细胞中B细胞和浆细胞的比例
　　各组淋巴细胞B细胞和浆细胞比例流式细胞术检测结果，见图3。



　　统计分析结果显示，与对照组比较，mi R-4286过表达组B细胞与浆细胞比例均升高（t=4.789,P<0.001;t=5.276,P<0.001）;mi R-4286沉默组B细胞与浆细胞比例均降低（t=6.472,P<0.001;t=4.865,P<0.001）。与mi R-4286沉默组比较，转化生长因子β阻断组B细胞与浆细胞比例均升高（t=7.875,P<0.001;t=7.390,P<0.001），见表3。



　　（3）各组细胞中Tfr细胞的比例
　　各组淋巴细胞中Tfr细胞比例流式细胞术检测结果，见图4。



　　统计分析结果显示，对照组、mi R-4286过表达组、mi R-4286沉默组、转化生长因子β阻断组滤泡调节性T细胞的比例分别为（0.12±0.01）%、（0.06±0.01）%、（0.52±0.03）%、（0.05±0.01）%；mi R-4286过表达组、mi R-4286沉默组与对照组比较差异均有显著性意义（t=4.181,P=0.002;t=15.073,P<0.001），mi R-4286沉默组与转化生长因子β阻断组比较差异有显著性意义（t=17.074,P<0.001）。


　　三、讨论
　　肾脏移植是治疗各种终末期肾病最有效的方法，环孢素、他克莫司及西罗莫司等免疫抑制剂的临床应用显著降低了急性T细胞介导排斥反应的发生，提高了肾移植的成功率。临床研究结果显示，排斥反应已经成为引起晚期肾移植失败的主要原因，目前临床还缺乏很好的处理手段，血浆置换或B细胞清除具有一定的治疗效果，但存在严重感染、治疗失败、移植肾失功等风险，因此寻找新的预防和治疗靶点具有重要的临床意义。
　　大量研究显示mi RNA与肾脏移植预后和排斥反应发生具有紧密的相关性，靶向调控mi RNA表达可显著延长移植肾的存活时间。此次研究收集肾移植患者的临床样本，发现排斥反应患者外周血淋巴细胞中的mi R-4286mRNA表达显著升高，且与Tfh细胞比例呈正相关，与Tfr细胞比例呈负相关，这说明mi R-4286可能通过调控Tfr细胞参与肾移植排斥反应的发生和进展。
　　mi RNA芯片检测结果显示，mi R-4286在肾移植急性排斥反应患者血浆中的表达显著上调。mi R-4286主要发挥着免疫调控作用，研究显示mi R-4286可显著下调转化生长因子β的表达，促进免疫反应。体外实验显示，mi R-4286沉默组下调淋巴细胞分泌干扰素γ等炎症分子的能力显著降低，B细胞和浆细胞增殖能力显著下降，Tfr细胞比例显著升高。在恶性肿瘤中mi R-4286发挥着完全不同的生物学功能，非小细胞肺癌、前列腺癌和食管癌组织中mi R-4286的表达显著上调，mi R-4286可通过JAK2/STAT3和PTEN等通路促进肿瘤细胞的增殖、侵袭和转移等。恶性肿瘤发生风险显著提高是器官移植患者服用抗排斥药物最主要的不良反应和死亡原因之一，据统计肾移植患者恶性黑色素瘤、肾癌和淋巴瘤等疾病的发病风险提高了10-100倍。在肾移植后，靶向抑制mi R-4286表达可通过调控免疫反应降低排斥反应的发生，同时还能显著降低恶性肿瘤发生风险。
　　Tfh细胞高表达CXCR5、PD1和ICOS等，可显著促进B细胞增殖和向浆细胞分化，白细胞介素21在这个过程中发挥着关键性的作用。肾移植排斥反应患者体内的Tfh细胞比例显著升高，与患者的病情呈正相关性。Tfr细胞是近期发现的一种新型免疫调节细胞，与调节性T细胞共同起源于原始T细胞，其可通过细胞-细胞接触和分泌转化生长因子β等免疫抑制分子，抑制Tfh细胞，达到调控体液免疫的功能。此次研究显示，相对于非排斥反应的肾移植患者，排斥反应患者外周血Tfr细胞比例显著降低，相关抗体浓度则显著升高。不同组患者体内Tfr细胞的功能没有差异。此次研究显示，mi R-4286沉默可通过上调淋巴细胞中Tfr细胞比例提高B细胞增殖和向浆细胞分化的能力，转化生长因子β在这个过程中发挥着重要的作用。
　　综上，mi R-4286在肾移植排斥反应患者外周血淋巴细胞中高表达，mi R-4286沉默可能通过转化生长因子β途径上调淋巴细胞中Tfr细胞的比例，抑制体液免疫。该研究为移植患者发生慢性抗体介导排斥反应的预防和治疗提供了新的靶点。


本文仅供学习参考，完整准确内容请查阅原始文献：徐媛,牛玉林,袁智辉,贾磊,潘光辉.上调滤泡调节性T细胞治疗肾移植抗体介导的排斥反应[J].中国组织工程研究,2022,26(26):4118-4122.


【链接】


如何预防和治疗肾移植后抗体介导的排斥反应
https://bbs.yizhiwang.org.cn/forum.php?mod=viewthread&tid=87190


王祥慧：抗体介导的排斥反应的预防和治疗手段
https://bbs.yizhiwang.org.cn/forum.php?mod=viewthread&tid=88112


摘读：肾移植排斥反应临床诊疗技术规范（2019版）
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T细胞亚群的检测在肾移植中的应用
https://bbs.yizhiwang.org.cn/forum.php?mod=viewthread&tid=71203


45例肾移植术后稳定状态受者淋巴细胞亚群的动态变化及其与肾功能的相关性分析
https://bbs.yizhiwang.org.cn/forum.php?mod=viewthread&tid=87378