本帖最后由 神州大地 于 2012-7-6 12:03 编辑
HBsAg-specific特性的t细胞反应免疫接种后MPL / QS21)添加佐剂的疫苗
CD4 + T细胞被孤立于16肝移植受者约1年成功后接种乙肝疫苗佐剂与MPL和QS21),从6健康对照标准接种乙肝疫苗,并从21未接种疫苗,HBV-infected肝移植受者长期HBIG下治疗。细胞因子分泌模式(IL-2、4、5、-10年,使用干扰素和TNF - T细胞的HBsAg-specific ELISPOT刺激后被确定与表面。
正如预期的那样,T细胞从健康对照组疫苗接种者(健康对照组1 - 6)显示(Th1)依据免疫应答IL-2 HBsAg-specific T细胞分泌,使用干扰素和TNF -。平均每105 T细胞单元格的值是20 IL-2-secreting细胞(范围,价值的细胞),27使用干扰素——分泌细胞(范围,21-31细胞),和23 TNF -分泌细胞(范围,12-25细胞)(表1)。
表1。HBsAg-specific t细胞反应免疫接种后1年成功MPL / QS21)添加佐剂的乙肝疫苗*患者细胞因子
IL-2 IL-4 IL-5使用干扰素- TNF - il - 10
注:数据表示为意味着±标准差的spot-forming细胞从一式三份的测试。抗原识别的阈值被设定为两倍数量的地点的消极的控制(中位数为3点,每1×105 T细胞;范围0 - 3)。
缩写:HC,健康的控制。
*数量的细胞因子分泌细胞/ 1×105 CD4 +细胞。
论文积极的结果。
16肝移植受者的新疫苗注射,12显示出明显的t细胞反应特定刺激后体外。令人惊讶的是,只有IL-10-secreting细胞可以被检测到的大量(中位数,33 IL-10-secreting细胞/ 105 T细胞;范围,10-58细胞),而只有阈值水平的细胞会分泌出使用干扰素- TNF -,和IL-2、4和5被发现。
CD4 + T细胞的21个未接种疫苗的肝移植受者HBIG在持续治疗没有分泌il - 10或任何其他细胞因子在特定抗原刺激(数据没有显示)。
HBsAg-specific表征t细胞反应在免疫接种
T细胞反应11名患者注射疫苗和佐剂MPL和QS21)确定的6健康捐献者在天前和后28复种7和传统疫苗(表2)。再次,T细胞从健康对照组疫苗接种者(健康对照组1 - 6)显示一个Th1-biased免疫反应明显增加(P < 0.05)HBsAg-specific T细胞的数量IL-2分泌,使用干扰素和TNF - 4周后复种。
表2。HBsAg-specific t细胞反应复种之前和之后与标准乙肝疫苗*病人助推器第七天之前助推器后28天之后助推器
IL-2 IL-4 IL-5 TNF - IL-2 il - 10使用干扰素- il - 10 IL-4 IL-5使用干扰素- TNF - IL-2 IL-4 IL-5使用干扰素- TNF - il - 10
注:数据表示为意味着±标准差的spot-forming细胞从一式三份的测试。抗原识别的阈值被设定为两倍数量的地点的消极的控制(中位数为3点,每1×105 T细胞,范围从0 - 3)。
*数量的cytokine-secreting细胞/ 1×105 CD4 +细胞。
缩写:HC,健康的控制。
论文积极的结果。
控制
相比之下,细胞因子分泌模式的病人接种疫苗佐剂MPL / QS21)后发生显著变化的助推器。之前的助推器,HBsAg-specific IL-10-secreting T细胞仍存在于9 11例(中位数,31 IL-10-secreting细胞/ 105 T细胞;范围,11-51细胞)。然而,7天后复种,分泌减少到背景il - 10级疫苗接种者。相反,细胞的9名患者现在显示典型的Th1-cytokine模式与IFN-μ和TNF -分泌,细胞在8 9也显示IL-2的生产。频率的HBsAg-specific T细胞的患者类似的发现的那些健康受试者在那个时间点。28天,在对照组中使用干扰素的数量———TNF -,和IL-2-secreting细胞仅略微改变了,而在病人的细胞因子的模式再度逆转:il - 10又能在5例显示一个倾向比以前更高水平复种(P < 0.01),而使用干扰素的数量———TNF -,和IL-2-secreting细胞已经下降到阈值水平。4名患者仍然表现出了Th1-biased模式与INF——结合TNF分泌——分泌T细胞(3例)和IL-2分泌细胞(2例)。在所有情况下,然而,T细胞的数量减少了反应(P < 0.001)。
复种后一年,4例(数字5、8、9岁和14)被用于测试(图1)。病人5号仍然表现出了Th1-type免疫反应。在3其他病人,只有Il-10-secreting T细胞是当前显示的频率与之前得到的结果与1年前的助推器。
图1。HBsAg-specific T细胞的量化。丰富的CD4 + T细胞进行IL-2(浅灰色的酒吧),使用干扰素-(白色酒吧),TNF -(深灰色的酒吧),和il - 10(黑酒吧)生产,此前由ELISPOT刺激和表面。(一)病人5。(B)患者8。(C)患者9。(D)患者14。数据表示为cytokine-producing细胞的数量在1×105 T细胞(在减法的背景值的井没有HBsAg)。香港证监会,spot-forming细胞。
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IL-10-secreting T细胞的表征
CD4 + T细胞的表面活性测试阴性选择分离(例如,通过删除CD8 + T细胞,/δT细胞,B细胞,自然杀伤细胞,树突细胞、单核细胞、粒细胞、单核细胞和红细胞。排除这种可能性,抗原提呈细胞用于cocultures il - 10的根源,整个外周血单核细胞分数是枯竭的CD4 + T细胞和测试。只有背景水平的il - 10的分泌保持(0 - 3 IL-10-secreting细胞/ 1×105个细胞),从而确定CD4 + t细胞数量的主要来源il - 10(数据没有显示)。要确定CD4 + T细胞反应属于CD25 +的疟蚊的调节性T细胞的CD4 + T细胞的分数是耗尽CD25 +细胞使用anti-CD25磁珠。再一次,IL-10-secreting T细胞几乎完全消失了(图2)。
图2。HBsAg-specific CD4 + T细胞分泌il - 10属于CD4 + CD25 + T细胞族群/。CD4 + T细胞(黑酒吧)或CD4 + CD25 + T细胞耗尽细胞(灰色酒吧)进行生产,此前刺激和il - 10通过ELISPOT表面。数据表示为cytokine-producing细胞的数量在1×105 T细胞(在减法的背景值的井没有HBsAg)。
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为功能的表征CD4 + CD25 +净化/ IL-10-secreting T细胞,免疫接种之前孤立,被cocultivated联合自体Th1-cells获得7天后复种(图3)。实验与细胞从4个病人显示完整的镇压IL-2——和INF——分泌在100000和50000年il - 10分泌细胞,而有25000个细胞,3例病人,low-to-medium INF -分泌可能再次被观察到。
图3。HBsAg-specific TReg剂量依赖性抑制Th1反应方式。(一)患者2。(B)患者8。(C)患者9。(D)患者17。T细胞进行IL-2(灰条),使用干扰素-(白色酒吧),和il - 10(黑酒吧)生产,此前由ELISPOT刺激和表面。t细胞反应前测定助推器(TReg)和7天之后(Th1)。两个t细胞亚涨跌不一,由ELISPOT测试(Th1:TReg比率:一,100.000:100.00;B,100.000,100.000:25.000:50.000;C)。数据表示为cytokine-producing细胞的数量每好(在减法的背景值的井没有HBsAg)。香港证监会,spot-forming细胞。
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量化Anti-HBs-producing B细胞的体外
研究了Anti-HBs-production在细胞水平上通过分析anti-HBs-secreting B细胞体外复种之前和之后。Anti-HBs-producing细胞可以被检测到的所有11个疫苗接种者谁获得了加强剂(表3)。
表3。Anti-HBs血清和Anti-HBs-secreting细胞复种之前和之后与标准乙肝疫苗后第七天前病人助推器助推器后28天助推器
Anti-HBs(IU / L)* Anti-HBs-secreting细胞Anti-HBs __(IU / L)* Anti-HBs-secreting细胞Anti-HBs __(IU / L)* Anti-HBs -分泌细胞论文
注:数据表示为意味着±标准差的spot-forming细胞/ 2×105 B细胞从一式三份的测试。抗体识别的阈值被设定为两倍数量的地点的消极的控制(中位数为3点,每2×105 B细胞,范围从0 - 3)。
缩写:HC,健康的控制;Neg,消极的。
*在血清。
论文积极的结果。
anti-HBs secreting-B细胞的数量非常类似于肝脏移植和健康的研究人群接种之前以及1星期后助推器。相比之下,4周后anti-HBs-producing助推器频率的B细胞均明显高于4控制疫苗接种者比在肝移植患者:而控制显示的中进一步提升至46 anti-HBs-secreting细胞/ 2×105 B细胞(范围,12 - 67),anti-HBs-secreting B细胞的数量在移植患者中位数下降到每2×只有25 105 B细胞(范围,每年全世界出现)(P < 0.05)。
相比之下非常好的血清学anti-HBs-response移植中的患者主要的疫苗接种,第七应对助推器免疫血清学传统疫苗仅仅是温和的。8两个病人显示没有真正的增加(少于10%)在anti-HBs;在3人,anti-HBs浓度上升了42 - 70%;其余6显示一个anti-HBs增加至少是2的因数(介于2.4 -和10.8倍)。anti-HBs之间不存在相关性,血清和生产的anti-HBs体外。
引用
近年来,也进行了一些尝试肝移植患者免疫与商业乙型肝炎疫苗,但结果是令人失望的。3 - 6然而,一个新的乙肝疫苗佐剂与3-deacetylated MPL和QS21)诱导抗体浓度高中的16个20肝移植患者由于慢性肝炎B.7卓越的免疫原性疫苗促使我们去调查的细胞免疫应答的移植受者成功接种疫苗。大约1年接种后,我们寻找HBsAg-specific T细胞。令我们感到惊讶的发现,只有CD4 + CD25 +积极的T细胞,分泌的细胞因子il - 10只,而健康的人接种疫苗Th1-biased传统显示CD4 + T细胞IL-2生产,使用干扰素和TNF -。复种与传统的移植受者乙型肝炎疫苗改变了细胞因子模式的外围T细胞显著:7天内,IL-10-secreting细胞已经完全消失了,并在大多数情况下,取而代之的是T细胞Th1-cytokine显示模式。三周后,然而,这种模式开始再次改变;在5的最初9例细胞产生il - 10又取代了Th1细胞。
像其他杀死了疫苗,乙肝疫苗主要诱发helper-T-cell响应。辅助性T细胞的人口是异构的,包括至少2子集,不同的细胞因子分泌的模式。IL-2 Th1细胞产生,使用干扰素和TNF -,IL-4,34细胞分泌,5和-10.9在一个健康的人群,免疫接种乙肝疫苗触发一个Th1-dominated免疫反应。10 HBsAg-specific,CD4 +细胞产生IL-2,使用干扰素和TNF -出现几天后的第一个疫苗剂量和保留在循环甚至失踪后anti-HBs的。11我们的知识,然而,HBsAg-specific IL-10-producing细胞从来没有被描述过,无论是在接种疫苗后也不自然发生的。这一发现这样的细胞在我们的疫苗接种者因此引发了两个问题:是什么性质的这些细胞,并且从他们从哪里开始?
il - 10是一种多功能的细胞因子,调节各种活动的hematopoetic细胞。IL - 10的最基本的功能被认为是,总体限制和终止由抑制炎症反应合成的一系列的细胞因子如使用干扰素-和IL - IL - 10可以产生2.12通过一系列不同的细胞包括CD8 +和CD4 + T细胞,B淋巴细胞和单核细胞。
描述我们的疫苗接种者IL-10-producing细胞通过损耗实验表明,他们的确是CD4 + T淋巴细胞,从而排除了其他外周血单核细胞源亚种的生产il - 10。此外,细胞变成了还CD25 +。因此,很容易让人认为他们属于疟蚊的CD4 +调节性T细胞。这些细胞以前被称为il - 10的secretors和β-,可以抑制cells.13 Th1
一个特定的标志/ CD25 + TReg CD4 +细胞(TReg细胞)是具体forkhead-family转录因子,这是至关重要的发育和功能的这些细胞。我们发现这个转录因子来几乎完全表达的CD4 + CD25 + t细胞/人口(数据没有显示)。然而,这并没有证据表明这些HBsAg-specific细胞在这个分数也积极为这个标记,因为它们代表的只有少数人。另一方面,我们可以发现这些细胞能够抑制细胞因子的生产完全由Th1细胞诱导的免疫接种。因此,总结我们的发现,我们毫不怀疑,这些细胞是真正TReg细胞特异性的表面。
因此,这个问题的起源,这些细胞仍然是。鉴于我们目前的知识在TReg细胞,任何的解释将假设。原则上,有2个可能:要么HBsAg TReg细胞转为,或者他们是诱导新创通过接种疫苗。
参与TReg细胞的免疫反应,乙肝病毒被描述最近。al.14弯腰等表明患者慢性乙型肝炎病毒感染的港口增加T淋巴细胞百分比展出的标记TReg细胞。他们能够抑制扩散和使用干扰素-生产的乙肝核心抗原(HBcAg)应该T淋巴细胞。作者没有寻找HBsAg-specific TReg细胞;不过,有可能,TReg细胞表面存在特定的病毒携带者。作者得出TReg细胞可能有助于对抗乙肝病毒的免疫反应不足,导致慢性感染。类似地,研究结果的慢性感染巨细胞病毒(人类免疫缺陷病毒,和丙型肝炎病毒还建议一个角色在持久化TReg细胞的感染。15、16此外,表明TReg细胞可以出现在免疫抑制治疗。17我们的研究人群是持续感染并在永久的免疫抑制,这种情况很可能会支持细胞出现的监管。然而,我们不能在检测HBsAg-specific IL-10-secreting细胞在21个未接种疫苗的HBV-positive肝移植受者。这可能被视为一个严肃的反对TReg先前存在的细胞。然而,我们的ELISPOT检测是基于一个24小时的潜伏期。再孵化时间(几天,就采用屈et al。)仍可能引发IL-10-secreting TReg细胞。因此,接种疫苗可以增加了级别(流行)的这些细胞。不幸的是,我们不能在测试AS02接种疫苗后立即主要由于严格的研究方案给制造商。然而,在几乎所有病人复种Th1-biased显示为正常的免疫反应,但是紧接着又TReg再现的人口在大多数疫苗接种者。因此,或许有人认为成功的主要AS02接种疫苗引起一个Th1响应,后跟一个特定TReg增加细胞,它逐渐取代了Th1细胞。
TReg细胞可能已经存在在我们的疫苗接种者在接种疫苗之前,甚至有可能负责穷人应对传统疫苗。It is generally accepted that TReg cells are induced during infection, playing a major
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发表于 2012-7-5 23:07:17
