本帖最后由 杭州多多 于 2011-9-2 09:59 编辑
乙肝病毒cccDNA 检测的临床意义
4. 1 在HBV相关肝癌患者组织中的分布和在其发生发展中可能的作用
张涛等对20 例HBV 感染的肝癌患者肝组织采用PCR 检查cccDNA ,结果9 例癌组织、13 例癌旁组织检测出cccDNA , 并且在部分血清HBVDNA 阴性的患者中,仍可在肝组织中检测出cccD-NA 。提示cccDNA 在HBV 慢性感染的自然过程中,可能持久存在,也表明cccDNA 在癌组织和癌旁组织的分布不同。
Wong 等对21 例表面抗原阳性的肝癌患者进行了肝内总HBV DNA 和cccDNA 的定量分析。结果显示,在表面抗原阳性的肝癌患者中,肝内总HBV DNA 水平在癌组织和非癌肝组织中没有显著差异,但癌组织中的cccDNA 高于非癌肝组织。在癌组织中,其cccDNA 占HBV DNA 比例也明显高于非癌肝组织。癌组织中cccDNA 占HBV DNA的比例较高的可能原因为: (1) 癌组织HBV 复制水平低于非癌肝组织; (2) cccDNA 池是肝癌形成过程中的副产品; (3) cccDNA 对肝癌的发生具有直接作用。
4. 2 评价乙肝患者肝脏损伤程度的可能指标之一从理论上推测,存在于肝细胞核内的cccDNA分子在肝细胞变性、坏死时可以释放到血液中,对于同一个患者而言,肝脏损伤程度越重,变性坏死的肝细胞越多, 其血液中的cccDNA 水平也就越高。Chen 等发现乙肝患者肝组织中HBVDNA 和cccDNA 均阳性,而血清cccDNA 仅于肝炎活动时检测到,而且cccDNA 和病毒载量在谷丙转氨酶上升以前就已经上升到较高水平,一旦谷丙转氨酶水平上升, cccDNA 水平就会迅速下降; 提示血清HBV cccDNA 的检测有可能作为慢性乙肝病人HBV 活化和肝脏损伤的早期信号。
4. 3 可能作为抗病毒药物疗效评价及停药的指标之一 目前临床上评价抗乙肝病毒药物疗效的主要指标包括肝功能的改善、血清HBV DNA 水平的变化、HBeAg 血清学转换以及肝组织的病理学改变等,这些指标对临床医生判断患者病情和选择抗乙肝病毒药物非常重要和实用,然而对于何时停用抗病毒药物、停用抗病毒药物后HBV 是否会重新复制活跃导致乙肝复发,仍缺乏客观有效的指标。虽然血清HBsAg 的消失或血清学的转换被认为是临床“治愈”的标准,但有研究发现,血清HBsAg 消失的患者,肝内仍可能存在HBV DNA 和cccDNA ,从而成为停药后复发的来源。目前认为,只有出现能够彻底清除cccDNA 的药物, 才能真正清除HBV ,而肝组织中cccDNA 的检测就能给治疗的时间提供参考。Werle-Lapostolle 等用实时荧光定量的方法检测了98 例处于自然史状态乙肝患者及32 例进行ADV 治疗的乙肝患者肝穿刺组织的HBV DNA 和cccDNA ;结果发现,应用ADV 治疗48 周后,患者肝细胞的cccDNA 和HBV DNA 平均下降了84 %和98 % ,并且患者外周血中HBV DNA下降的平均速率> 肝细胞的HBV DNA > 肝细胞的cccDNA。ADV 治疗时, 肝内cccDNA、肝内总HBV DNA 和血清HBV DNA 的变化与血清HB2sAg 滴度降低相关, cccDNA 拷贝数和肝内HBVDNA 水平与HBcAg ( + ) 的细胞数相关;ADV 治疗后cccDNA 水平明显下降,而HBV 抗原阳性细胞的比例没有下降,即感染的肝细胞数目并未下降,提示每个细胞内的cccDNA 水平下降了。
Bourne 等发现肝内HBV DNA 形式能反映慢性乙型肝炎患者的血清学和病毒学应答情况,只有当肝内HBV DNA 和cccDNA 水平都下降后,才能检测到血清中HBV DNA 水平的下降; 发生HBeAg 应答的患者,其肝内HBV DNA 和cccDNA水平的绝对值下降,而与此同时cccDNA 占总HBVDNA 比例上升。
Yuen 等对82 例接受拉米夫定治疗的慢性乙型肝炎患者进行研究,结果显示,安慰剂组24 周和52 周的总HBV DNA 和cccDNA 水平与基线水平无统计学差异,提示HBV 感染是处于一种平衡状态的。对于在拉米夫定治疗52 周出现HBVDNA 多聚酶结构域C 的酪氨酸2甲硫氨酸-天门冬氨酸-天门冬氨酸( Typrosine-methionine-aspartate-aspartate ,YMDD) 变异的15 例患者,其血清cccD-NA 的对数下降值低于无YMDD 变异的患者。发生YMDD 变异的患者在52 周时,其cccDNA 水平与基线水平相比无统计学差异。而对于在52 周发生YMDD 变异的患者,其在24 周时的cccDNA 较基线下降的对数值就低于无YMDD 变异的患者,提示24 周时的病毒抑制程度越大,其52 周发生YM-DD 变异的概率就越低。其机制可能是通过抑制病毒在感染的肝脏细胞内复制,降低cccDNA 的补给,从而打破cccDNA 的平衡状态。
4. 4 作为探讨是否存在肝外复制的重要指标HBV 不仅仅是一种嗜肝病毒,一些肝外组织中也可检测到HBV DNA ,如肾脏、胰腺以及外周血单个核细胞( Perip heral blood mononuclear cell , PB-MC) 等。但关于PBMC 能否被HBV 感染的问题目前仍有争议。Torii 等报道慢性乙肝和急性乙肝恢复期患者PBMC 中均存在cccDNA ,是HBV 的肝外复制场所。郭皓宇等对17 例经拉米夫定治疗取得初步疗效而停药的患者进行研究,在复发的10 例患者中,停药时PBMC 中有9 例检出HBVcccDNA ,由此可见,HBV cccDNA 的确与停药后病毒再次复制活跃有关,甚至可能是复发的来源。Ca-brerizo 等和Stoll-Becker 等也在PBMC 中检测出cccDNA。但也有报道认为PBMC 中无cccD-NA 的存在。不同的研究者得出相反的结果,可能与HBV 感染状态、PBMC 的状态、PCR 引物的设计存在差异等因素有关。
5 小结与展望
目前,HBV cccDNA 的检测还没有成为临床常规的检查手段,但随着PCR 技术的进一步完善,HBV cccDNA 有可能成为临床评价抗病毒疗效的重要指标,在确定抗病毒治疗的最佳治疗方案、时间、治疗终点以建立最优的抗HBV 策略,分析机体和药物清除cccDNA 的机制,以及促进新药的研发等方面具有重要意义。同时, HBV cccDNA 的检测对研究HBV 的生物学特性、致病机制、乙型肝炎慢性化机制等方面也将具有积极的意义。 |